成人做爰免费视频免费看_成人a级高清视频在线观看,成人a大片在线观看,成人a大片高清在线观看,成人av在线播放,一a一级片,一级黄 中国色 片,一级黄 色蝶 片,一级黄色 片生活片

般注意事項：

• Trizol試劑含有苯酚，具有毒性和刺激性，注意操作。如皮膚接觸Trizol，請立即用大量去垢劑和水沖洗，如仍有不適，請聽取醫生意見。
• RNase污染的主要來源是操作過程中手和空氣中的浮沉，注意隨時勤換手套，樣品盡可能蓋嚴；盡量不要對著RNA樣品呼氣或說話。用0.01%的DEPC水浸泡過夜，然后滅菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01%（體積比） diethyl- pyrocarbonate（DEPC）至重或MiliQ級水中，處理過夜，滅菌即成DEPC水。
• 細胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不*會降低zui后得率，因為一部分RNA會殘留在未裂解的細胞中。細胞裂解之后要看不見顆粒狀物質（結締組織和骨除外）。在清洗和裂解細胞時在低溫下操作，防止在操作過程中釋放的內源RNase降解了RNA。
• 酵母和一些細菌由于細胞壁的特殊結構，可以加入TRNzol試劑同時加入無RNase的玻璃珠并劇烈振蕩，使細胞裂解充分。
• TRNzol試劑也適合于樣品和組織裂解液的貯存，這尤其適合于同時處理樣品較多或操作較為費時時。

一：低得率

A：樣品裂解或勻漿處理不*；勻漿不*時，基因組DNA分子仍然很大，溶液粘稠。變性的蛋白質和基因組DNA一起形成絮狀凝集物容易包裹RNA，使之不能有效地釋放到溶液中。

B：沉淀不*：從小于≤2×105動物細胞、≤2 mg動物組織或RNA含量低的樣品中提取RNA時，勻漿體積太大，將造成RNA過分稀釋而不能有效地沉淀下來。當從這樣的樣品中提取RNA時，應按比例減少抽提溶液，異丙醇沉淀后延長冰浴和離心時間，具體實驗參數見相應操作步驟。加入少量糖原可提高RNA產量又不影響RT-PCR。

C：zui后得到的RNA沉淀未*溶解

二：A260/A280<1.65

A．檢測吸光度時，RNA樣品不是溶于TE，而是溶于水。低離子濃度和低pH條件下，A280值會較高。

B．樣品勻漿時加的試劑量太少。

C．勻漿后樣品未在室溫放置5分鐘。

D．水相中混有有機相。

E．zui后得到的RNA沉淀未*溶解。

三：RNA降解

A．組織取出后沒有馬上處理或冷凍；細胞生長過度

B．樣品或提取的RNA沉淀保存于-5－-20℃，未在-60－-70℃保存。

C．細胞在胰酶處理時被破壞或勻漿中組織或細胞成分未*分散，樣品中RNA酶未*滅活。。

D．溶液或離心管未經RNase去除處理。Tip頭、離心管、貯存管受RNA酶污染。

E．電泳時使用的甲酰氨pH低于3.5

F．樣品存放時間太長，裂解液中b-ME不足；

四：DNA污染

A：操作不規范

B．樣品中含有組織溶劑（如乙醇，DMSO等），強緩沖液或堿性

溶液。

C．樣品勻漿時加的試劑體積太少或樣品量太多，污染有機物和中

間相。

D：在轉錄特別活躍的細胞破碎過程中，由于某種原因一部分mRNA與DNA、蛋白質形成了聚合體的形式.Trizol不能分離這種聚合體，從而造成了在所提取的RNA中有少量基因組DNA的污染.在這種情況下可以用無RNAse的DNAse處理，Trizol再次抽提或蛋白酶K消化后再用酸性苯酚抽提。
 

五：蛋白和多糖污染

離心去上清后得到的RNA沉淀經以下操作應可去除這些污染：在上一步中，每使用1ml Trizol，在水相中加0.25ml異丙醇和0.25ml高鹽溶液（0.8M檸檬酸鈉和1.2 NaCl）。混合，離心，然后按照操作進行。這種方法可使蛋白多糖和多糖留在溶液中，而沉淀出純RNA。從植物中提取RNA時，應在勻漿后離心，并加上以上操作步驟。