化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
FLAG標(biāo)記物
閱讀：642 發(fā)布時間：2010-11-24| 序列 | AspTyrLysAspAspAspAspLys（ D Y K D D D D K） |
| 抗體 | 鼠源單抗MI和M2 |
| 供應(yīng)商 | Sigma-Aldrich，其他供應(yīng)商 |
| 商品化試劑 | 在E．coli和酵母表達(dá)系統(tǒng)的氨基末端和羧基末端標(biāo)記載體 純化和標(biāo)記的抗體以及親和樹脂純化多肽 |
| 非商品化試劑 | 在E．eoli，酵母細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)的多種載體 |
FLAG標(biāo)記物是惟一專為標(biāo)記目的設(shè)計的多肽標(biāo)記物（Hoppetal．1988），其特點是標(biāo)記物的序列不是來自任何已知的蛋白。該標(biāo)記物是由8個氨基酸殘基組成的多肽，具有親水性，可置于蛋白的氨基或羧基末端。有兩種商品化的抗體MI和M2，可識別FLAG標(biāo)記物。Mi抗體的結(jié)合要求表位是氨基末端，因而僅適用于將標(biāo)記物連接到蛋白的氨基末端。二價陽離子（為Ca2+）可增強MI抗體與FLAG標(biāo)記物的結(jié)合，因此金屬螯合劑，如EDTA可引起其相互作用*或部分破壞，可在很溫和的條件下純化。
M2抗體的存在使該系統(tǒng)顯示出更大的應(yīng)用價值，因為FLAG無論是處于蛋白分子中間或羧基末端，該抗體可識別相同的FLAG表位。M2對FLAG表位的識別不需要二價陽離子的存在，并且可以通過游離的多肽競爭性地將FLAG標(biāo)記蛋白從M2分子中溫和洗脫下來。
多種FLAG標(biāo)記蛋白可保留全部的生化活性（如轉(zhuǎn)錄因子、生長因子和酶），這些標(biāo)記物亦廣泛應(yīng)用于細(xì)胞染色、免疫印跡和免疫沉淀試驗中。由于已有各種載體和檢測試劑出售，包括抗體親和樹脂和直接標(biāo)記抗體的商品，使其成為人們常選用的系統(tǒng)。
由于對抗-FLAG抗體的特異性進行了更詳盡的研究，使得可以采用其他替代序列（Slootstraetal．1997）和更短部分（Knappik和Pluckthunl994）作為標(biāo)記物。抗-FLAG抗體產(chǎn)生的本底一般非常低，但M2抗體至少可與一種細(xì)胞蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)（Schafer和Braunl995）。