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  上海索萊寶生物科技有限公司 

專業(yè)生化試劑供應(yīng)商，專業(yè)分子生物學(xué)試劑生產(chǎn)商   

T4 DNA Ligase
T4噬菌體DNA連接酶
說明：T4噬菌體DNA連接酶主要催化兩條DNA鏈上相鄰的5’磷
酸基和3’-羥基之間形成磷酸二酯鍵。它的主要用途是連接
帶匹配粘端的DNA分子，或使平端的雙鏈DNA分子互相連接
或與合成接頭相連接。也可催化DNA與RNA之間以及少數(shù)
RNA之間的連接，但不能催化單鏈DNA之間的連接。
單位定義：0.01Weiss單位的T4 DNA連接酶可以在16℃下反應(yīng)
20分鐘，連接95％的1μgλDNA-HindⅢ的分解物。
注意：一個(gè)Weiss單位的T4 DNA連接酶相當(dāng)于核酸外切酶測(cè)定
中的0.2單位或60個(gè)粘性末端（New England Biolabs）
存儲(chǔ)緩沖液：10mM Tris-HCl（pH7.5 25℃）,50mM KCl，
1mM DTT，0.1mM EDTA和50％glycerol。
10×反應(yīng)緩沖液：300mM Tris-HCl（pH7.8 25℃）,
100mM MgCl2，100mM DTT，10mM ATP
質(zhì)量控制：
1 活性：大于3Weiss單位/微升。
2 藍(lán)白克隆鑒定：12Weiss單位T4 DNA連接酶與3μg經(jīng)內(nèi)
切酶酶切產(chǎn)生的5’或3’粘性末端DNA在4℃下，反應(yīng)16
小時(shí)后轉(zhuǎn)化到大腸桿菌JM109培養(yǎng)，白色菌落小于總菌落
數(shù)的2％；12 Weiss單位T4 DNA連接酶與3μg經(jīng)內(nèi)切酶酶
切產(chǎn)生的鈍性末端DNA在4℃下，反應(yīng)16小時(shí)后轉(zhuǎn)化到大
腸桿菌JM109培養(yǎng)，白色菌落小于總菌落數(shù)的5％。
3 核酸內(nèi)切酶測(cè)定：20Weiss單位酶與1μg超螺旋質(zhì)粒
DNA在37℃下反應(yīng)16小時(shí)，DNA的電泳圖譜不發(fā)生變化。
4 單鏈和雙鏈DNase測(cè)定：20Weiss單位酶與50ng同位素
標(biāo)記的單鏈或雙鏈DNA反應(yīng)16小時(shí)，單鏈DNA的釋放量
小于2％；雙鏈DNA的釋放量小于1％。
5 RNase測(cè)定：37℃時(shí)，20Weiss單位酶與50ng 3H-RNA
保溫5小時(shí)，釋放量小于1％。
6 蛋白純度：SDS PAGE 檢測(cè)純度≥90％。
儲(chǔ)存條件：−20℃
From Promega M1801S