核酸服務
一、核酸的提取與純化
1、RNA的提取
新鮮組織提取效果佳，其次為液氮和-70℃及組織RNA保存液中保存的樣本，不推薦 使用-20℃及以下溫度下保存的樣本。
細菌用量：1-2ml ，需要新鮮培養（公司可代為培養，另行收費）。
植物用量：500mg ，需要新鮮植物葉片。
細胞用量： 10 5 -10 6 ，需要新鮮培養（公司可代為培養,另行收費）。
組織用量： 500mg ，需要新鮮標本或凍存在液氮罐中的標本。
血液用量： 5ml ，需要新鮮標本或凍存在液氮罐中的標本。
2、Genomic DNA的提取
新鮮組織提取效果佳，其次為液氮和-70℃保存的樣本，-20℃不宜長期保存樣本，否則提取的DNA長度較短。
細菌用量： 10ml收集液，需要新鮮或 -20 ℃保存標本。
植物用量：葉片100mg，需要新鮮或 -20 ℃保存標本。
細胞用量： 10 5 -10 6，需要新鮮或 -20 ℃保存標本。
組織用量： 25mg ，需要新鮮或 -20 ℃保存標本。
血液用量： 5ml ，需要新鮮標本或凍存在液氮罐中的標本。
酵母用量：10 5 -10 6 或10ml液體培養物，需要新鮮或 -20 ℃保存標本。
3、質粒 DNA 的小量 / 中量 / 大量提取
高拷貝質粒： 10ml 菌液， 25-50 μ g
低拷貝質粒： 20ml 菌液， 15-30 μ g
高拷貝質粒： 100-200ml 菌液， 500-1000 μ g
低拷貝質粒： 100-200ml 菌液， 500-800 μ g
10ml 菌液， 25-50 μ g
二、PCR及RT-PCR
1、PCR擴增條件的優化
客戶提供模板（可代提取）和引物（可代合成）
2、常規PCR實驗
客戶提供模板（可代提取）和引物（可代合成）
客戶提供模板（可代提取）和引物（可代合成）
客戶提供模板（可代提取）和引物（可代合成）
3、引物的設計與合成
采用兩套以上的軟件設計，保證引物的可靠性。請用戶提供相應
的模板序列，通過 傳送。
OPC ，PAGE，HPLC純化
4、RNA 的反轉錄及 PCR 擴增
由用戶提供新鮮制備的模板（可代提取）
由用戶提供引物（可代合成）
三、熒光定量PCR
服務項目：
常規定性分析：
通過終點法分析樣本中把序列的陰性/陽性，在終點讀板鑒定的同時對擴增過程進行全程跟蹤，可及時發現樣本污
染、假陽性、“弱陽性”等情況，是目前病原體檢測等臨床應用的佳選擇。同時也是科學研究領域的重要應用技術。
相對定量：
通過對不同樣本靶基因的表達或含量進行檢測，可以判斷不同樣本間靶基因表達的相對高低，是對不同樣本相
同靶基因表達情況的“比較”。
定量：
合成一個和某靶基因具有相同序列的片段（或構建載體）作為標準品，通過測量OD值便可以計算出標準品的摩
爾濃度，不同濃度的標準品在相同體系（即相同擴增效率）下對應的ct值具有高度的*性和良好的重復性，可以
作為該基因的“標尺”。通過對未知樣本中該靶基因ct值的檢測，便可由“標尺”測算出未知樣本中靶基因的摩爾
濃度。達到定量的目的。
HRM分析：
高分辨率溶解曲線是一種檢測基因突變、進行基因分型和SNP檢測的新工具，可以迅速的檢測出不同樣本中單
個堿基的差異。HRM 檢測技術操作簡便，速度快，高通量，靈敏性好，特異性高，同時對試劑、儀器、軟件及經驗
技術也提出了較高的要求。
檢測方法：
Sybr Green I 染料法：成本較低，并且可以通過溶解曲線發現非特異性擴增。
taqman 探針法：比染料法具有更高的特異性，但成本也相對較高。
其他：除以上兩種常用方法，我公司ROCHE 480 II還可以滿足Molecular beacon、LUX等其他多種方法的檢測。
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