乙酰膽堿受體抗體檢測試劑盒（進(jìn)口）（ELISA法）

產(chǎn)品詳情

預(yù)期用途

乙酰膽堿受體抗體檢測試劑盒（進(jìn)口）用于定量測定人血清中乙酰膽堿受體抗體（AChR Ab）濃度。乙酰膽堿受體（AChR）的自身抗體是重癥肌無力神經(jīng)肌肉接頭衰竭的原因，這是一種神經(jīng)肌肉疾病，導(dǎo)致肌肉無力和易疲勞。 這些抗體的測量在疾病診斷和管理中具有相當(dāng)大的價值。

乙酰膽堿受體抗體檢測試劑盒檢測原理

測定系統(tǒng)取決于人血清中AChR Ab與AChR上類似位點結(jié)合的能力，如各種單克隆抗體，如MAb1（包被在ELISA板孔上）和/或MAb2和/或MAb3（用生物素標(biāo)記）。 在不存在AChR Abs的情況下，在板孔上包被的MAb1，AChR和MAb2與MAb3生物素之間形成復(fù)合物。 然后通過添加鏈霉抗生物素蛋白過氧化物酶（SA-POD），底物（TMB）和終止溶液來檢測結(jié)合的MAb2和MAb3生物素。 在AChR Abs存在下，MAb1-AChR-MAb2 / MAb3生物素復(fù)合物的形成受到抑制，導(dǎo)致結(jié)合的SA-POD較少，450nm處的終吸光度降低。 測試血清中AChR Abs濃度越高，MAb生物素結(jié)合的抑制越大。

乙酰膽堿受體抗體檢測試劑盒組成成分

乙酰膽堿受體抗體檢測試劑盒檢測步驟

1.將100μl陰性對照（CI），校準(zhǔn)物（1-4），陽性對照（CII，CIII）和測試血清移入單獨的1.5ml Eppendorf管中，并做好相應(yīng)標(biāo)記。
2.將25μl胎兒和成人型AChR混合物（K + L）移入每個Eppendorf管（來自步驟1）并密封管。確保所有液體都在每個管的底部（如果有疑問，將離心管在微量離心機中以10-15,000g離心10秒鐘）。輕輕渦旋并在2-8℃下孵育過夜（16-20小時）。
3.使用渦旋混合器輕輕混合來自步驟2的每個樣品-AChR混合物管。根據(jù)測定方案，將50μl每種樣品-AChR混合物移液到相應(yīng)的孔（A）中，復(fù)孔測定。
4.蓋上平板并在室溫（18-25℃）下孵育60分鐘，同時以> 500rpm振搖。
5.通過使用洗板機，或通過在合適的容器上快速翻轉(zhuǎn)板孔框架來棄去板內(nèi)溶液。用300μl洗滌溶液（稀釋的B溶液）洗滌孔3次。在干凈的吸水紙上輕輕敲反過來的板孔以去除多余的洗滌液。
6.向每個孔中加入50μl重構(gòu)的MAb-生物素溶液（由H和J制備）。
7.蓋上平板并在室溫（18-25℃）下孵育60分鐘，同時以> 500rpm振搖。
8.通過使用洗板機，或通過在合適的容器上快速翻轉(zhuǎn)板孔框架來棄去板內(nèi)溶液。用300μl洗滌溶液（稀釋的B溶液）洗滌孔3次。在干凈的吸水紙上輕輕敲反過來的板孔以去除多余的洗滌液。
9.向每個孔中加入100μl重構(gòu)的SA-POD（由D和G制備）。
10.蓋上平板并在室溫（18-25℃）下孵育30分鐘，同時以> 500rpm振搖。
11.通過使用洗板機，或通過在合適的容器上快速翻轉(zhuǎn)板孔框架來棄去板內(nèi)溶液。用300μl洗滌溶液（稀釋的B溶液）洗滌孔3次。手工洗板情況下，額外多一個洗滌步驟，即在后一次洗板時，用純凈水洗板一出去任何的泡沫。在干凈的吸水紙上輕輕敲反過來的板孔以去除多余的洗滌液。
12.向每個孔中加入100μl底物溶液（E）并立即搖動。
13.在室溫下黑暗中孵育30分鐘。
14.向每個孔中加入50μl終止溶液（F）。搖動板5秒鐘。
15.在添加終止溶液后30分鐘內(nèi)讀取450nm處的光密度，以620或690nm作為參考波長。

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