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深圳市科潤達生物工程有限公司
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淺析ELISA檢測試劑盒的運用注意事項和操作程序

時間:2021/1/26閱讀:1761
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  一:運用注意事項
  1.  ELISA檢測試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可運用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
  2. 濃洗刷液也許會有結晶分出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗刷時不影響效果。
  3. 嚴峻按說明書的操作進行,試驗效果斷定有必要以酶標儀讀數為準。
  4. 本試劑不一樣批號組分不得混用。
  5. 封板膜只限一次性運用,以避免交叉污染。
  6. 全部樣品,洗刷液和各種廢棄物都應按感染物處理。
  7. 底物請避光保存。
  二:操作程序
  1. ELISA檢測試劑盒分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入標準品50μl;在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品后稀釋度為5倍)。每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動混勻,37℃溫育60分鐘。
  2. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復5次,拍干。
  3. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  4. 取出酶標板,每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
  5. 測定:以空白孔調零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
  6. 根據ELISA檢測試劑盒免費代測標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應該乘以總稀釋倍數。

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