人血管生成素1（ang-1）ELISA試劑盒使用說明書

    本試劑盒僅供研究使用。

藥品名稱：

通用名：人血管生成素1  （ang-1）酶聯免疫診斷試劑盒

使用目的：

    本試劑盒用于測定人血清、血漿、或其它相關組織液中血管生成素1  （ang-1）含量。

實驗原理

    本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人血管生成素1 （ang-1）水平。用純化的人血管

生成素1 抗體包被微孔板，往微孔板中加入人血管生成素1，再與HRP 標記的血管生成素1

 （ang-1）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB 顯色。

TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣

品中的血管生成素1 呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準

曲線計算樣品中人血管生成素1  （ang-1）含量。

試劑盒組成

  1   20 倍濃縮洗滌液           30ml×1 瓶       7    終止液                 6ml×1 瓶

  2   酶標試劑                12ml×1 瓶       8    標準品（4500ng/L） 1.0ml×1 瓶

  3   酶標包被板               12 孔×8 條       9    標準品稀釋液              1.5ml×1 瓶

  4   樣品稀釋液               10ml×1 瓶       10   說明書                 1 份

  5   顯色劑A 液              6ml×1 瓶        11   封板膜                 2 張

  6   顯色劑B 液              6ml×1/瓶        12   密封袋                 1 個

標本處理及要求

    1．血清、血漿、腦脊液、腹腔液標本可直接測定；

    2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性。

    3．采集后盡早進行實驗，若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反

       復凍融。

操作步驟

1.  標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10 孔，在*、第二孔中分別加標

    準品200μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液100μl，混勻后；再各取200μl 分別

    加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液100μl，混勻，在第三孔

    和第四孔中先各取100μl 棄掉，然后再各取100μl 分別加到第五、第六孔中；再在第五、

    第六孔中分別加標準品稀釋液100ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取100μl 分別

    加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液100μl，混勻后從第七、

    第八孔中分別取100μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液100μl，

    混勻后從第九第十孔中各取 100μl  棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 100μl，濃度分別為

    3000 ng/L，2000 ng/L ，1000 ng/L，500 ng/L，250 ng/L）。

2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣

    品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液80μl，然后再加待測樣品20μl （樣

    品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4.  配液：將20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水20 倍稀釋后備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此

    重復5 次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。

7.  溫育：操作同3。

8.  洗滌：操作同5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

    15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止

    液后15 分鐘以內進行。

計算

    以標準物的濃度為橫坐標，OD              值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD 值計算出標

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，

即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未

   用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

   控制在5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值

   大于標準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計

   算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．嚴格按說明書操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。

6．底物請避光保存。

7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

檢測范圍：

  200 ng/L — 4000 ng/L

規格：

  96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個月

廈門慧嘉生物科技有限公司專業提供各品牌ELISA試劑盒
詳情請登入: http://www.biohj.com
http://www.biohj.com/product.aspx?cid=1 

查詢，或    ：sale@biohj.com