抗心磷脂抗體ACA的檢測方法

    抗磷脂抗體是一組針對各種帶負電荷磷脂的自身抗體，包括抗心磷脂抗體（anticardi-

olipinantibody，ACA）、抗磷脂酰絲氨酸、抗磷脂酰胺醇、抗磷脂酰甘油、抗磷脂酸抗體等。國內一些單位對SLE、習慣性流產、神經系統疾病、急慢性白血病、腎臟疾病、消化系統疾病等研究發現，ACA與這些疾病的凝血系統改變、血栓形成、血小板減少等密切相關，并與疾病的發生機理也有關聯。ACA較其他四種負電荷性磷脂抗體陽性率高，且敏感，故ACA檢測日益受到重視。已建立了RIA和ELISA等方法。國內已有商品化的ELISA法檢測ACA試劑盒問世，可以作為常規檢查。

    1。試劑  ①純心磷脂：可購買商品心磷脂（cardiolipin，CL）；②辣根過氧化物酶（HRP）標記的羊抗人IgC．、IgM、IgA。

    2，操作步驟  將純心磷脂用無水乙醇配成12．5／／g／mL，加入干燥潔凈的聚苯乙烯反應板，50~L／孔，置氮氣下室溫蒸發干燥。次日以PBS-T洗板3次后，以0．3％明膠封閉，150gL／孔，置37T1 90rmn，洗板3次。加1：1 000稀釋的待測血清或陽性和陰性對照血清（稀釋液為0．01mol／L，PBS-T，pH7．4，含4％PEG），lOOgL／孔，置37~C濕盒反應2ho洗板5次后，加HRP-羊抗人ISC或Igm、IZA（以含1％BSA的PBS-T-PEG稀釋成1：800）100~L／孔，置37~C濕盒反應1h。洗板5次后甩干，加新鮮配制的底物液i00／~L／孔（10ngOPD溶于25mL，0．1mol／L，pH5．0的檸檬酸緩沖液，加3％H20：20／~L），37％反應10～15min，待充分顯色后每孔滴加2mol／LU2S04 50gL終止反應，測各孔492nm吸光度（A）。

    3．結果判定與臨床意義  標本及陽性、陰性對照均采用雙孔測定，取2孔A值的平均值以P／N~>2．1判為陽性。

在腦血栓患者中，IsC型ACA陽性率zui高并與臨床密切相關。約70％未經治療的ACA陽性患者可發生自發性流產和宮內死胎，尤其是IzM型ACA可作為自發性流（死）產的前瞻性指標。已證實ACA陽性者血小板減少發生率均明顯高于陰性者，以IgC型抗體多見，并與血小板減少程度有關。ACA也是SLE常見的自身抗體，在SLE患者中樞神經系統（CNS）血栓形成與陽性ACA顯著相關。總之，ACA可作為抗磷脂抗體綜合征（包括血栓形成、自發性流產、血小板減少和CNS病變）的診斷指標之一。

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