本試劑盒僅供研究使用。

通用名：人雄烯二酮（A2）酶聯免疫分析試劑盒

英文名：Human  A2  ELISA  Kit

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿、或相關組織液中雄烯二酮（A2）的含量。

本試劑盒應用酶聯免疫競爭法測定標本中人雄烯二酮（A2）水平。用純化的人雄烯二酮（A2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入雄烯二酮（A2），和HRP標記的羊抗人抗原，使它們競爭結合，，經過*洗滌后加底物TMB顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的雄烯二酮（A2）的含量呈負相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人雄烯二酮（A2）的含量。

1．血清、血漿標本可直接測定；

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

3．采集后盡早進行實驗，若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

1.         標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上按序設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；再各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后，在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉；再各取50μl分別加到第五、第六孔中；再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（ 稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃 度分別為 12          μg /L，8μg /L ，4μg /L，2μg /L，1μg /L）。

2.         加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，輕輕晃動混勻。

3.         加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

4.         溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。  

5.         配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

6.         洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

7.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

8.         終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

9.         測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

  以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔OD值的），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5． 嚴格按說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

6．本試劑不同批號組分不得混用。

7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．底物請避光保存。

0.8μg /L -15μg /L

48人份/盒

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月

 

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