實驗目的】
（1）了解核酸瓊脂糖凝膠電泳的原理，學會其具體的操作程序。
（2）對提取的DNA進行檢測，掌握紫外電泳圖譜的觀察分析方法。
【實驗原理】
瓊脂糖凝膠電泳是一種非常簡便、快速、zui常用的分離純化和鑒定核酸的方法。帶電荷的物質在電場中的定向運動稱為電泳，核酸分子是兩性解離分子，在pH8.0時，DNA分子帶負電荷在電場中向正極移動。采用瓊脂糖凝膠介質作為電泳支持物，長度不同的DNA分子由于受凝膠阻遏作用大小不一，遷移速度不同，從而達到有效分離DNA的目的。
【儀器、材料、試劑】
（一）儀器
1．電泳裝置：電泳儀、水平電泳槽、梳子、制膠槽
2．紫外觀察：凝膠成像系統
3．高速離心機
（二）材料
1．瓊脂糖
2．三羥甲基氨基甲烷（Tris）
3．硼酸
4．乙二胺四乙酸（EDTA）
5．溴酚藍
6．蔗糖
7．溴化乙錠（EB）
8．DNA Marker（λDNA）
9．稱量紙、容量瓶、瓷盤、一次性手套、取液器、三角瓶、量筒（100mL）、Tip頭（10uL）、膠帶
（三）試劑配制
1．5×TBE（pH8.0）（電泳緩沖液） 1000 ml
配制方法：
稱取Tris 54g、硼酸 27.5 g，再加入20ml的0.5mol/LEDTA加三蒸水定容至
1000ml搖勻后，轉到準備好的輸液瓶中，貼上標簽，高壓滅菌后，降至室溫，4℃保存備用。
2．凝膠加樣緩沖液（6×）（指示劑） 100 ml
稱取溴酚藍0.25 g、蔗糖40 g然后加入三蒸水定容至100ml搖勻后，4℃保存備用。
【實驗步驟】
（一）、制膠
1．稱取0.4g（適量）瓊脂糖置于三角瓶中，加入50ml 0.5×TBE緩沖液。
2．微波爐加熱，煮沸、振搖，反復加熱、振搖2-3次，使瓊脂糖充分融化。
3．膠帶將膠床兩端粘好，底部粘嚴，以防凝膠滲漏，插好梳子。
4．待膠冷卻至60℃左右時，將融化的瓊脂糖小心地倒入膠床中，速度要快，讓 膠自然冷卻至*凝固（約需要20-30分鐘）。
5． 小心向上方拔出梳子，避免前后左右搖晃，以防破壞膠面及加樣孔，去掉制膠槽兩邊的膠帶，小心將膠和膠床放入電泳槽中，樣品孔在陰。
6． 向電泳槽中加入0.5×TBE電泳緩沖液，液面高于膠面約1-2mm。
（二）、上樣電泳
1、取2μl上樣液（溴酚藍指示劑）于Parafilm上，加2μl水與2μl樣品DNA反復吹吸，混勻。
2、Tip頭垂直伸入液面下膠孔中，小心上樣于孔中。
3、接通電源，打開高壓開關，電泳開始以正、負極鉑金絲有氣泡出現為準。
4、根據指示劑遷移的位置，判斷是否中止電泳。切斷電源后，再取出凝膠。
5、凝膠取出后于含EB的溶液中染色20分鐘。
（三）、凝膠紫外觀察：
染色后的凝膠取出于紫外監測儀或凝膠成像系統中觀察，照相，保存，記錄結果。
【注意事項】
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1. 瓊脂糖融化時，檔位不宜太高。
2. 制膠和加樣過程中要防治氣泡的產生。
3. EB具有強誘變性，可致癌。必須戴手套操作，嚴格注意防護。
4. 加樣時，Tip頭不宜插入樣品孔太深，也不要穿破膠孔壁，否則樣品滲漏或
DNA帶型不整齊。
5. 電源接通時，應核實凝膠的方向是否正確。
6. 電泳儀有電壓顯示，并不一定標志電泳槽已接通，應觀察電極氣泡出現情況。
負極的氣泡比正極多一倍，表示電泳已開始。
7． 溴化乙錠可插入到DNA分子的雙鏈中，在紫外光的照射下，插入溴化乙錠的DNA呈橙紅色熒光，所以溴化乙錠可以作為熒光指示劑指示DNA含量和位置。
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