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當前位置：上海聯(lián)碩生物科技有限公司>>技術文章>>關于細胞傳代方法
一：細胞與試劑方面
1、細胞(單層細胞，鏡檢合適)
2、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液或MEM 培養(yǎng)液或199 等合適細胞有要求的培養(yǎng)液)
3、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（1 萬單位）
4、7.5％NaHC03 溶液
5、0.25％胰蛋白酶
6、 PBS 洗液。
二：試驗小用具方面
1、小方瓶(100m1)
2、克氏瓶
3、膠塞
4、吸管(10ml、1m1）
5、細胞吹打管（20 ml）(以上用具需經(jīng)121℃至少15 分鐘高壓滅菌)
6、C02 孵箱
7、超凈臺
8、倒置顯微鏡
9、4℃、- 20℃冰箱
三：細胞傳代的操作過程
1、挑選細胞：鏡檢細胞，挑選成長狀態(tài)杰出，細胞界限清晰，具有立體感，形狀好無污染、無反常及可疑病變細胞。
2、制造細胞培養(yǎng)液：按以下配比制造MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液100ml 內(nèi)，參加滅活小牛血清10m1，慶大霉素溶液0.3m1，7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。（僅供一般參考）。
3、消化細胞：先用PBS 洗液沖刷細胞外表1-2 次，每次10m1，棄去洗液，向細胞瓶內(nèi)參加0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，細胞瓶平放，使消化液覆蓋細胞外表。
4、至細胞脫落到胰酶中：每瓶參加10m1 細胞培養(yǎng)液吹打渙散細胞，按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中，再參加10m1 細胞培養(yǎng)液重復吹打一次后分裝，然后補加至所需培養(yǎng)量。
5、加塞，置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2～4 天成片(由細胞接種濃度決定)。
6、填寫傳代記錄。
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