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當前位置：上海聯碩生物科技有限公司>>技術文章>>脂質體轉染法的原理和操作步驟
一般來說細胞轉染的方法主要包括：電穿孔法、顯微注射、基因槍、磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染法、多種陽離子物質介導、病毒介導的轉染等。
01
脂質體的轉染方法原理
脂質體作為體內和體外輸送載體的工具，已經研究的十分廣泛，用合成的陽離子脂類包裹 DNA，同樣可以通過融合而進入細胞。
使用脂質體將 DNA 帶入不同類型的真核細胞，與其它方法相比，有較高的效率和較好的重復性。
中性脂質體是利用脂質膜包裹 DNA，借助脂質膜將 DNA 導入細胞膜內。
帶正電的陽離子脂質體，DNA 并沒有預先包埋在脂質體中，而是帶負電的 DNA 自動結合到帶正電的脂質體上，形成 DNA-陽離子脂質體復合物，從而吸附到帶負電的細胞膜表面，經過內吞被導入細胞。
02
脂質體轉染的操作步驟
操作步驟：
(1) 細胞培養：取 6 孔培養板 (或用 35 mm 培養皿)，向每孔中加入 2 mL 含 1～2×105 個細胞培養液，37℃ CO2 培養至 40%～60% 匯合時 (匯合過分，轉染后不利篩選細胞)。
(2) 轉染液制備：在聚苯乙/烯管中制備以下兩液 (為轉染每一個孔細胞所用的量)A 液：用不含血清培養基稀釋 1-10 μg DNA，終量 100μL，B 液：用不含血清培養基稀釋 2-50 μgLR，終量 100μL，輕輕混合 A、B 液，室溫中置 10-15 分鐘，稍后會出現微濁現象，但并不妨礙轉染 (如出現沉淀可能因 LR 或 DNA 濃度過高所致，應酌情減量)。
(3) 轉染準備：用 2 mL 不含血清培養液漂洗兩次，再加入 1 mL 不含血清培養液。
(4) 轉染：把 A/B 復合物緩緩加入培養液中，搖勻，37℃ 溫箱置 6～24 小時，吸除無血清轉染液，換入正常培養液繼續培養。
(5) 其余處理如觀察、篩選、檢測等與其它轉染法相同。
注意：轉染時切勿加血清，血清對轉染效率有很大影響。
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