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上海聯(lián)碩生物科技有限公司
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人磷脂酰乙醇胺抗體IgM(PE IgM)酶聯(lián)免疫檢測

時間:2019/4/4閱讀:1223
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人磷脂酰乙醇胺抗體IgM(PE IgM)酶聯(lián)免疫檢測

          試劑盒使用說明書     AE94586Hu   

使用前仔細閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理,來檢測人磷脂酰乙醇胺抗體IgM(PE IgM),只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

用  途用于人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中磷脂酰乙醇胺抗體IgM(PE          IgM)測定。

工作原理:

本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定樣品中人磷脂酰乙醇胺抗體IgM(PE IgM)水平。向預(yù)先包被了磷脂酰乙醇胺抗體IgM(PE IgM)克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入磷脂酰乙醇胺抗體IgM(PE IgM),溫育;溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗PE IGM抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺與樣品中磷脂酰乙醇胺抗體IgM(PE IgM)的濃度呈正相關(guān)。

 

試劑盒組成:

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1

1

 

封板膜

2片(48

2片(96

 

密封袋

1

1

 

酶標(biāo)包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品:96pg/ml

0.5ml×1

0.5ml×1

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

鏈霉親和素-HRP

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

生物素標(biāo)記的抗PE IGM抗體

0.5ml×1

1 ml×1

2-8℃保存

顯色劑A

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

顯色劑B

3 ml×1

6 ml×1

2-8℃保存

終止液

3ml×1

6ml×1

2-8℃保存

濃縮洗滌液

20ml×20倍)×1

20ml×30倍)×1

2-8℃保存

 

需要而未提供的試劑和器材:

  1. 37℃恒溫箱。
  2. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
  3. 精密移液器及一次性吸頭
  4. 蒸餾水,
  5. 一次性試管
  6. 吸水紙

 

注意事項:

  1. 從2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
  2. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗誤差
  3. 嚴(yán)格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
  4. 為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜
  5. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
  6. 底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

 

洗板方法:

手工洗板方法:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。

自動洗板:如果有自動洗板機,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中

 

標(biāo)本要求

1不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

2.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

 

操作程序:

  1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:(本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。)

48pg/ml

5號標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

24pg/ml

4號標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

12pg/ml

3號標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

6pg/ml

2號標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3pg/ml

1號標(biāo)準(zhǔn)品

120μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入120μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 

  1. 根據(jù)代測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
  2. 加樣:1)空白孔,空白對照孔不加樣品,生物素標(biāo)記的抗PE IGM抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;2)標(biāo)準(zhǔn)品孔:加入標(biāo)準(zhǔn)品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標(biāo)準(zhǔn)品中已事先整合好生物素抗體,故不加);3)代測樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗PE IGM抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘。
  3. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
  4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  5. 顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  6. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
  7. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進行。
  8. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。

 

操作程序總結(jié):

檢測范圍:1pg/ml-55pg/ml

 

保存:2-8℃。

有效期:6個月(2-8℃)。

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