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723次二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒檢測原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗人DAO抗體包被于酶標板上,實驗時標本或標準品中的DAO會與包被抗體結合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗人DAO抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗人DAO抗體與結合在包被抗體上的人DAO結合、生物素與親和素特異性結合而形成免疫復合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物,TMB在辣根過氧化物酶的催化下現藍色,加終止液后變黃。用酶標儀在450nm波長處測OD值,DAO濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標準曲線求出標本中DAO的濃度。
二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒實驗通用規則:
1、要保證移液槍的準確性,誤差不能超過2%.可用水和電子天平進行確定。但有專業人員進行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標準品時。
3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復到室溫,以使結果更穩定。
4、實驗時,要使底物避光保存。
5、用槍吸取液體時速度不能太快,以免產生氣泡而使吸取量不準確。
6、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
7、將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
8、液體全部加完后,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
9、溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標板,防止水分的蒸發。
10、洗板時,每次洗液加入后,應靜置1分鐘,使清洗更加*。沒有洗板機時,倒去液體后,要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
11、洗液不夠時,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
12、底物是光敏感的,要在臨用前現配醫`學教育網搜集整理。
13、檢測前,要打開酶標儀,使之穩定10分鐘以上。
14、底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應盡量避免接觸。
15、待檢樣品要澄清,否則會影響結果。
16、溫浴時間應遵守試劑盒規定。
17、應盡量做雙孔實驗,這樣才能保證數據的準確性。
18、對結果有疑問的樣品要用其它方法進行確證。
二胺氧化酶(DAO)ELISA試劑盒標本收集:
血清:全血標本于室溫放置2小時或4℃夜后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,收集血液的試管應為一次性的無熱原,無內毒素試管。血漿:抗凝劑推薦使用EDTA,標本采集后30分鐘內于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測。避免使用溶血,高血脂標本。其它生物標本:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測標本應清澈透明,懸浮物應離心去除。標本收集后若不及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃/-80℃電冰箱內,避免反復凍融,6個月內進行檢測,4℃保存的應在1周內進行檢測。 如果樣本中檢測物濃度高于標準品zui高值,請根據實際情況,做適當倍數稀釋(建議先做預實驗,以確定稀釋倍數)。
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