在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標本，加酶結合物，加底物。加樣時應將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產生氣泡。

加標本一般用微量加樣器，按規定的量加入板孔中。每次加標本應更換吸嘴，以免發生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定（如間接法ELISA）需用稀釋的血清，可在試管中按規定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結合物應用液和底物應用液時可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。

那么在ELISA中除了包被外，一般需進行45加樣。其中“45加樣”是什么意思？這里的45加樣，應當為45度加樣，即加樣槍的吸頭所在的直線應當與板條所在的直線呈45度角。

正確的加樣方法應為45度，吸頭貼著孔壁加入，應注意：

（1）角度太小，會使液體殘留在孔壁上，導致加樣不準確！

（2）吸頭應當貼著管壁和液面的交界處！      

在ELISA中加樣還要注意如下問題：

1. 吸取樣品時，加樣槍吸頭不應黏附多余的液體；加樣時不可90度向孔中滴加液體，這樣會導致液體殘留在吸頭上，加樣不準確！

2. 不要將吸頭伸入孔中，一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭，另一方面可能會將孔中的液體吹起來，加樣不準確！