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ELISA試劑盒有哪些操作應用領域

時間:2017/10/26閱讀:1642
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ELISA試劑盒具有活絡、特異、簡略、快速、安穩及易于自動化操作等特色。不只適用于臨床標本的查看,并且因為一天之內能夠查看幾百乃至上千份標本,因而,也適合于血清流行病學調查。ELISA法是免疫確診中的一項新技術,現已成功地應用于多種病原微生物所引起的流行癥、寄生蟲病及非流行癥等方面的免疫確診。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,依據現已運用的成果,本法不只能夠用來測定抗體,并且也可用于測定體液中的循環抗原,所以也是一種前期確診的杰出辦法。因而ELISA試劑盒在生物醫學各范疇的應用范圍日益擴大,可概括四個方面:
1、免疫酶染色各種細胞內成份的定位。
2、研討抗酶抗體的組成。
3、顯現微量的免疫沉淀反響。
4、定量檢測體液中抗原或抗體成份。
 
操作流程如下:
(1)待測樣品孔中每孔參加待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,參加純細胞裂解液100μl。 (2)酶標板置4℃,包被。
(3)洗板:吸干孔內反響液,用洗刷液過洗一遍(將洗刷液注滿板孔后,即甩去),之后將洗刷液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖擺。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗刷3-4次。
(4)陰性對照孔每孔參加PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔參加1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,悄悄混勻10s,置37℃暗處反響15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反響。
(12)別離測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終究測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以削減由容器上的劃痕或指印等形成的光干擾。
(13)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,核算S/N值。S/N≥2.1為陽性斷定規范。
 
注:ELISA試劑盒所用溶液配方
(1) PBS:稱取0.2g KH2P04, 2.9g Na2HP04?12H20、8.0g NaCl, 0.2g KCl,加雙蒸水至1000ml。
(2)包被緩沖液:稱取1.59g Na2CO3, 2.938 NaHCO3,加雙蒸水至 1000m1。
(3)洗刷液(PBST):含0.05% Tween-20的PBS。
(4)稀釋液:含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS,首要用以稀釋抗體、規范品、樣品。
(5)TMB顯色液:稱取1.84g Na2HP04.12H20, 0.51 g檸檬酸,加雙蒸水至1O0ml,配成檸檬酸-磷酸緩沖溶液。用10.5 ml 檸檬酸-磷酸緩沖溶液溶解1錠TMB,再參加35μl 3% H2O2
(6)細胞裂解液:1% TritonX-100,137mmol/L NaCl,20mmol/L Tris-HCl,2mmol/L EDTA,1mmol/L PMSF,pH 7.4。(其間PMSF溶于異丙醇中,配成1O mmo/L,-20℃ 儲存備用。

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