ELISA試劑盒的操作因固相載體的構成不同而有所區別，國內醫學檢驗通常均用板式點。   這篇文章將敘說板式ELISA各個操作過程的留意關鍵，ELISA檢查試劑盒珠式、管式及磁性球ELSIA，國外試劑均與特殊儀器合作運用。
按試劑盒闡明書的請求預備實驗中需用的試劑。ELISA頂用的蒸餾 水或去離子水，包含用于洗刷的，應為新鮮的和高質量的。自配的緩沖液運用pH計丈量較正。從冰箱中取出的實驗用試劑應待溫度與室溫平衡后運用。試劑盒中本次實驗不需用的部分應及時放回冰箱保留。
ELISA試劑盒的制造：對于每種細胞因子應仔細閱讀闡明書，留意每批的細節。在運用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地回收其間的細胞因子。根據每批闡明書中的細節，將凍干的細胞因子復溶。 通常待測抗原規范曲線的線性規模的可通過將規范品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用規范的ELISA操作流程、擴大試劑盒、第三類試劑、或改動酶底物體系可在必定規模內進步靈敏度。為了優化靈敏度，建議孵育規范品和標本。若運用過氧化物酶作為顯色體系，應禁止在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物ELISA試劑盒酶的活性。
可用作ELISA試劑盒測定的標本非常廣泛，體液（如血清 ）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、大便）等均可作標本以測定其間某種抗體 或抗原成份。ELISA試劑盒有些標本可直接進行測定（如血清 、尿液），有些則需經預處理（如大便和某些分泌物）。這些標本搜集的時刻、辦法和保留都有必定的請求。