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高速逆流色譜儀常用的溶劑體系選擇

閱讀:2470發(fā)布時間:2020-7-22

  1、分配系數(shù)測定法
  一個穩(wěn)定的兩相溶劑體系是否適合于目標(biāo)物質(zhì)的分離,通常要看物質(zhì)在該溶劑體系中的分配系數(shù)是否在一個合適的范圍內(nèi)。分配系數(shù)K=CS/CM或CU/CL。其中CS指溶質(zhì)在固定相中的濃度,CM指在流動相中的濃度,CU指溶質(zhì)在上相中的濃度,CL指溶質(zhì)在下相中的濃度。一般而言,對HSCCC合適的K值范圍是0.5~2。當(dāng)CS/CM≤0.5時,出峰時間太快,峰之間的分離度較差;當(dāng)CS/CM≥1時,出峰時間太長且峰形變寬。而當(dāng)0.5<CS/CM<2時,可以在合適的時間內(nèi),得到分離度較好的峰形。
  2、 薄層色譜法
  采用薄層色譜(TLC)法也可選擇對HSCCC合適的兩相溶劑體系。在硅膠板上作薄層色譜試驗,用水飽和的有機層(即兩相中的有機相)作展開劑。如果需要分離的組分的Rf>0.5(低級性溶質(zhì)),這說明此種條件適用于這些組分混合物的分離,而且弱極性的有機相適用于作流動相。對于極性較大的溶質(zhì)Rf<0.5,則極性較強的那一相可作流動相。
  3、PLC掃描法
  對于一個未知樣品,可以通過HPLC掃描的方法,對樣品的復(fù)雜程度及其組分的極性程度有一個初步的了解。具體來講,可以將樣品注入一根15cm長的C18HPLC柱,以乙腈和水為流動相,以1ml/min流速,從100%乙腈梯度洗脫1h,觀察樣品出峰的位置。如果絕大部分峰的保留時間都小于15min,也就意味著這些組分是由含量小于25%的乙腈流動相洗脫出來的,在高速逆流色譜儀中可以采用極性溶劑體系,如正丁醇-水等;如果峰的保留時間是在15~50min之間,意味著這些物質(zhì)具有中等極性,在CCC中可以采用中等極性溶劑;如果絕大部分峰在50min后洗脫出來,也就是由大于80%的乙腈流動相洗脫出來的,那么在CCC分離中應(yīng)該采用弱極性的容積體系。

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