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抗體保存指南
點擊次數：2309 發布時間：2021-4-22
如何正確保存抗體產品？為什么有的產品要保存在-20°，有的卻要放在4°冰箱？不同類型抗體儲存時候是否有差異？本篇將重點為大家解答，請保存好這份abcam抗體保存指南，以便于以后查詢。
一、保存溫度
對于我們的許多抗體而言，分裝為小等份（推薦每份體積為 10 μL）在 -20 ℃ 或 -80 ℃ 下凍存是最佳的保存條件。分裝抗體可以最大限度減少凍融對抗體造成的損壞，還可避免多次從同一管中移取抗體而引入污染。分裝后抗體只可凍融一次，如有剩余，應保存在 4 ℃ 下。
收到抗體后，請以 10,000 × g 離心 20 秒，沉降滯留在管蓋螺紋中的溶液，然后分裝抗體并將其轉移至低蛋白質結合的微量離心管中。分裝抗體的量取決于您在實驗中常用的量。分裝抗體應不少于 10 μL；分裝抗體量越少，濃度就越容易受到蒸發以及儲存樣品管表面吸附的影響。
在大部分情況下，可在收到抗體之后立即將其保存于 4 ℃ 下，可保存 1 至 2 周。具體產品還請遵循數據表上的保存建議，這一點非常重要
二、特例
切勿凍存酶偶聯的抗體，而應將其保存在 4 ℃ 下。凍融不僅會影響抗體的結合能力，還會降低酶活性。
偶聯抗體（無論是偶聯有熒光染料、酶還是生物素）應保存在深色樣品瓶中或用錫箔紙包裹樣品瓶。暴露于光下會影響偶聯物的活性。熒光偶聯物尤其容易發生光致漂白，因此在實驗各階段都應避光保存。
三、污染- 為了防止微生物污染，可將疊氮化na加入抗體制備物中，疊氮化na的最終濃度為 0.02% (w/v)。我們的多款抗體中都含有這種保護劑，其濃度范圍為 0.02%-0.05%。每個抗體產品數據表的保存緩沖液部分將對此進行說明。
IgG3 同型抗體的*之處在于其解凍后容易形成聚集體，因此應始終保存在 4 ℃ 下。
腹水液中可能含有蛋白酶，因此收到后應盡快凍存。
四、不使用疊氮化na的情況
如果要用抗體對活細胞進行染色或處理，或者要用抗體進行體內研究，請務必使用不含疊氮化na的制備物。這種抗菌劑對大部分生物體都有毒害作用：它會阻斷細胞色素電子傳遞系統。
疊氮化na會干擾涉及胺基的所有偶聯反應，因此必須在進行偶聯反應之前將其去除。完成偶聯反應之后，可使用疊氮化na保存抗體。另一種可用的抗菌劑是 0.01% 硫柳汞na（硫柳汞），這種物質不含伯胺。
抗體溶液中的疊氮化na可通過滲析或凝膠過濾去除。IgG 的分子量為 150,000 Da（IgM 約為 600,000 Da），疊氮化na的分子量為 65 Da。截留分子量為 14,000 Da 的微滲析裝置可使疊氮化物順利擴散出去，而抗體得以保留。
滲析過程在燒杯中（置于磁力攪拌器上，溫度保持 4 ℃）進行，每毫升抗體使用至少 1 升預冷的 PBS，攪拌滲析裝置 6 小時。更換 PBS 兩次，每次更換后均攪拌至少 6 小時。如有可能，所有材料都應滅菌，并且應在無菌條件下處理所得制備物。
五、凍融損壞
反復凍融可能使抗體變性，導致抗體形成聚集體，從而降低其結合能力。所以抗體產品務必要避免反復凍融。
對大部分抗體而言，在 -20 ℃ 下保存就已足夠；在 -80 ℃ 下保存并無明顯優勢。應避免使用無霜冰箱，因為此類冰箱的凍融循環（用于減少霜的形成）正是保存此類抗體需要避免的。出于相同的原因，應將抗體樣品瓶放在冰箱中溫度波動最小的區域，例如抵靠冰箱背板放置而不是置于冰箱門架上。
有些研究人員向抗體中加入冷凍保護劑甘油（最終濃度為 50%）以防止凍融損壞；甘油可將冷凝點降至 -20 ℃ 以下。雖然這種方法可用于多種抗體，但我們僅對少數幾種 Abcam 抗體在這種保存條件下的穩定性進行了測試，我們僅擔保遵循數據表建議進行保存的抗體的性能。我們不建議在 -80 ℃ 下保存含甘油的溶液，因為該溫度低于甘油的冷凝點。請注意，甘油可能會被細菌污染。如果加入了甘油或任何冷凍保護劑，應當小心操作，確保獲得無菌制備物。
六、蛋白質和穩定劑
- 將抗體稀釋至工作濃度后，在 4 ℃ 下保存不得超過一天。一般而言，以高濃度保存的蛋白質更不易降解，理想濃度是 1 mg/mL 或更高。這就是將蛋白質（如 BSA）作為穩定劑加入抗體溶液的基本原理。加入的蛋白質還能盡可能減少抗體結合到容器壁上造成的損失。請勿向將要進行偶聯的抗體中加入蛋白質穩定劑，因為蛋白質穩定劑會與抗體競爭，降低偶聯效率。