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Hypoxyprobe 缺氧探針檢測試劑盒

 
Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）是一家致力于為氧代謝紊亂引起的惡性和正常組織疾病提供診斷和治療工具的小公司。位于美國馬塞諸薩州伯靈頓（121 Middlesex Turnpike, Burlington, Massachusetts, USA 01803），屬于美國天然藥物公司（Natural Pharmacia International, Inc.，NPI）缺氧探針部門的衍生公司。 Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）的成立起源于James Raleigh教授（任職于查珀爾希爾（Chapel Hill）北卡羅萊納大學(xué)放射腫瘤學(xué)部門）和NPI（當(dāng)時位于北卡羅萊納Research Triangle Park）之間的合作。起初的合作著重于腫瘤缺氧的臨床研究。NPI大規(guī)模生產(chǎn)缺氧探針Pimonidazole HCl，而James Raleigh教授提供保護的抗體，特異性檢測人腫瘤上結(jié)合Pimonidazole的缺氧細胞。
總體來說，使用Pimonidazole HCl作為缺氧標記物，用在狗、大小鼠上的臨床前研究越來越受科研圈的關(guān)注。2002年NPI授權(quán)五年給Chemicon公司銷售缺氧探針試劑用于動物研究。2006年預(yù)測到市場對缺氧探針試劑的擴張需求，NPI終止chemicon授權(quán)并成立Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）以開發(fā)更且更寬廣的試劑用于動物和臨床研究。
  如今的Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）專注于研發(fā)非侵略性的缺氧標志物（Hypoxia maker）和缺氧依賴性的細胞因子，所有產(chǎn)品皆基于Pimonidazole核心結(jié)構(gòu)來開發(fā)。
特色產(chǎn)品：
HypoxyprobeTM-1 Kit 缺氧探針檢測試劑盒。
關(guān)鍵詞：
Hypoxyprobe, Inc.（缺氧探針公司）；Pimonidazole HCl；缺氧標志物（Hypoxia maker）；Chemicon Inc.； 
產(chǎn)品應(yīng)用： 
免疫化學(xué)法檢測細胞和組織缺氧情況，包括免疫熒光（IF），免疫過氧化物酶，WB或流式細胞分析（FC）；
試劑盒組分：

試劑盒組分詳細描述： 
一、Hypoxyprobe-1 
Hypoxyprobe-1是2-硝基咪唑的替代物，其化學(xué)名和成分是Pimonidazole hydrochloride（Pimonidazole HCl），分子量為290.8，水溶性為400mM（=116 mg/ml），紫外吸收（324nm）的吸光系數(shù)為7020（0.9%生理鹽水）。
Hypoxyprobe-1的粉末和溶液形式皆具化學(xué)穩(wěn)定性。比如，固體形式的Hypoxyprobe-1于柔弱光線下室溫保存2年，UV和HPLC分析法評估無任何降解發(fā)生。溶于0.9%生理鹽水的Hypoxyprobe-1，濃度100g/L置于2-8℃保存4.5年，UV和HPLC分析法評估無任何降解發(fā)生。
作用機理：缺氧細胞中Pimonidazole被還原后得以活化。這一活化的中間物與蛋白質(zhì)、多肽和氨基酸中的巰基基團（thiol groups）形成穩(wěn)定的加合物。Mab1抗體結(jié)合這些加合物從而能借由免疫化學(xué)法來檢測。
二、MAb1抗體 
MAb1是小鼠IgG1單克隆抗體（克隆4.3.11.3），為雜交瘤細胞克隆4.3.11.3表達液過濾除菌后得到的上清液，含60μg/ml MAb1和0.15%疊氮鈉。
感興趣組織可用免疫組化檢測（IHC），冰凍切片或者福爾馬林固定的石蠟包埋切片；也可組織降解后用流式分析法檢測；或用WB檢測。典型情況下，MAb1抗體經(jīng)1:50稀釋后，取100μl到組織切片上。然后加合適的二抗方法來檢測Pimonidazole加合物。
使用指南： 
1、 Animal Studies 動物研究 
研究正常或腫瘤組織缺氧首先通過靜脈注射（intravenous infusion）、腹腔注射（intraperitoneal injection）或口服（oral ingestion）法給Hypoxyprobe-1溶液，劑量為60mg/kg體重。比如，25g小鼠的探針用量為1.5mg/只小鼠。（高達400mg/kg的劑量用于小鼠無可見毒性或引起組織缺氧變化，但60mg/kg以低成本給予良好的染色結(jié)果）。
給藥后，Hypoxyprobe-1分布到包括大腦的所有組織，且僅僅在氧濃度≤14μM（相當(dāng)于pO2=10mm Hg，37℃）的細胞內(nèi)與蛋白質(zhì)巰基形成加合物。除了腫瘤之外，正常組織如肝臟、腎臟和皮膚含pO2等于或低于10mm Hg的細胞，也會結(jié)合Hypoxyprobe-1。
2、Tissue cultures 組織培養(yǎng) 
通常情況下，細胞懸液置于含100-200μM Hypoxyprobe-1的缺氧環(huán)境中孵育1-2h。之后細胞離心涂片、固定、MAb1和顯色或熒光二抗染色。