對(duì)于臺(tái)式掃描電鏡需要的生物樣品在制備時(shí)有哪些要求呢?今天就讓我們一起來(lái)了解一下吧。
臺(tái)式掃描電鏡的樣品，通常要求樣品*干燥，因?yàn)闃悠肥姨幱诟哒婵諣顟B(tài)。堅(jiān)硬、干燥的材料，如木頭、骨頭、羽毛、干燥的昆蟲(chóng)或貝殼(包括蛋殼)在檢測(cè)時(shí)所需的進(jìn)一步處理很少，但是活細(xì)胞和組織以及完整的軟體生物需要化學(xué)固定來(lái)保存和穩(wěn)定它們的結(jié)構(gòu)。
固定通常首先是將樣品浸泡在含有化學(xué)固定劑(例如戊二醛，有時(shí)與甲醛結(jié)合)和其他固定劑 的緩沖溶液中，可能還有一步用固定。接下來(lái)就是將固定好的組織脫水。
由于空氣干燥會(huì)導(dǎo)致生物樣品塌陷和收縮，所以通常采用有機(jī)溶劑(如乙醇或丙酮)置換細(xì)胞中的水，再臨界干燥流體(如液態(tài)二氧化碳)置換這些溶劑來(lái)實(shí)現(xiàn)固定。二氧化碳終在超臨界狀態(tài)下被去除，因此在干燥過(guò)程中樣品中不存在氣液界面。
干燥樣品一般用粘合劑(如環(huán)氧樹(shù)脂或?qū)щ婋p面膠帶)固定在樣品臺(tái)上，并在用顯微鏡檢測(cè)前濺射金或金/鈀合金。如果要對(duì)生物體內(nèi)部的超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行成像，可以對(duì)樣品進(jìn)行切片(用切片機(jī))。
如果掃描電鏡裝備有低溫顯微鏡的冷凍樣品臺(tái)，可以使用冷凍固定，并用低溫掃描電子顯微鏡對(duì)冷凍固定的樣品進(jìn)行檢測(cè)。
冷凍固定的樣品可以在真空下在特殊設(shè)備中冷凍斷裂，以揭示內(nèi)部結(jié)構(gòu)，在保持冷凍狀態(tài)的同時(shí)濺射涂層并將其轉(zhuǎn)移到掃描電鏡冷凍臺(tái)上低溫掃描電子顯微鏡也適用于對(duì)溫度敏感的材料如冰和脂肪的成像。
冷凍破碎、冷凍蝕刻或冷凍再破碎是一種特別適用于正面觀察類(lèi)脂膜及其摻雜的蛋白質(zhì)的制備方法。該制備方法揭示了嵌入在磷脂雙分子層的蛋白質(zhì)。
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