【飛諾美色譜】擁有良好的分離度是每一個色譜工作者都夢寐以求的事情，這里我們會詳細介紹分離度基本要素在方法開發過程中的重要性以及與分離方程之間關聯性。相信這對新手和有經驗的色譜工作者都很有用。
分離方程被認為有三個項，它們各自反映了你的方法的柱效、選擇性和保留度。柱效對于在轉移到較短的色譜柱時保持方法的分離度至關重要。
下面是兩個GC分析色譜圖。我們可以發現，較短的色譜柱對色譜柱的選擇性和容量的影響可以忽略不計，在這兩個色譜圖中，內徑（ID）和薄膜厚度保持不變。表1列出了我們應該注意的變量。
表 1 – 分離度變量
tR=保留時間
t0=“色譜柱容積"或“死體積"時間
t’=調整后的保留時間（取決于色譜柱容積）
α=選擇性（兩個峰的峰尖之間的關系）
k=容量因子（相對于固定相和方法條件的固有保留）
N=理論塔板（代表分析物與固定相之間的相互作用）
這兩個色譜圖代表了在使用新柱（長度正好是原始柱的一半）時保留時間和柱容積的比例效應。最終的效果是，我們的分離方程中的“選擇性"項和“保留度"項保持不變，其數學結果如表2所示。
表2 – 選擇性和保留度的對比
使用較短的色譜柱實際上會減少可用的理論塔板的數量，因為在較短的色譜柱上分析物與固定相相互作用的機會更少。這在第二張色譜圖中得到了證明，盡管在洗脫過程中，這些峰仍然能保持一定的峰形，但峰與峰之間的分離度降低了。
但如果在保持相比的情況下減小內徑和薄膜厚度，從而提高柱效率（N），最終可以使我們的分離度恢復到原始方法的值。較窄的內徑將增加分析物與固定相之間的相互作用頻率，而較薄的薄膜將增加分析物進出固定相時的傳質速率。在第三張色譜圖中，內徑和薄膜厚度被減小，使得兩個分析物的峰更尖銳，兩個峰之間的分離度也就更高。
柱效（N）代表峰的尖銳度和分析物與固定相之間相互作用的機會。柱效的計算考慮了峰的寬度和峰的保留時間。早期洗脫的峰通常具有較窄的寬度，顯示出其較高的柱效并可以提高該峰與相鄰分析物的分離度。
一半高度（W1/2）處的峰寬即一半高度處的實際寬度
GC和LC中都有一些技巧可以在縮短色譜柱的同時保持效率。在GC（氣相色譜）中，你可以保持相比的同時，減小內徑和薄膜厚度，以增加分析物和固定相之間的相互作用的頻率和速度。在LC （液相色譜）中，更小的顆粒增加了相互作用的頻率，同時也增加了分析物進出顆粒以及相關固定相的速度。
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