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【CEM】微波輔助的肽棕櫚酰化：提高合成效率的新策略
檢測樣品：多肽合成
檢測項目：肽棕櫚?；?/b>
方案概述：本文詳細介紹了肽棕櫚?；淖詣踊⒉ê铣煞椒ǎ▽嶒灢襟E、試劑準備、儀器使用和數(shù)據(jù)分析。通過優(yōu)化合成參數(shù)，成功提高了目標肽的純度和產(chǎn)量，并顯著減少了廢物產(chǎn)生，展示了微波技術(shù)在肽合成中的高效性和實用性。
一、介紹
本程序詳細說明了在0.10毫摩爾規(guī)模下，使用Liberty系列自動化微波肽合成儀將棕櫚酸簡單且高效地偶聯(lián)到N端肽上的方法。
請將此文檔與Liberty手冊和安全數(shù)據(jù)表（P/N 601400）一起使用。在操作儀器之前，請閱讀并充分理解所有文檔。
圖1. 棕櫚酸
注意
必須采取適當(dāng)?shù)念A(yù)防措施，避免接觸試劑或試劑蒸汽。應(yīng)根據(jù)用戶的危險材料安全程序和試劑制造商的安全數(shù)據(jù)表，佩戴相應(yīng)的防護裝備。請參考這些指南以正確處理和處置試劑。所有廢棄物的處理應(yīng)符合所有適用的國家、地區(qū)的健康與安全法規(guī)。
圖2. 棕櫚酸與肽的偶聯(lián)
步驟1：編寫微波方法
創(chuàng)建“90°C 6分鐘偶聯(lián)”微波方法
1. 從“編輯”選項卡中，選擇“微波方法”。
2. 選擇以下篩選條件：“0.10”合成規(guī)模和“偶聯(lián)”。
3. 通過點擊復(fù)制按鈕，創(chuàng)建“標準偶聯(lián)”微波方法的副本。
4. 重命名為“90°C 6分鐘偶聯(lián)”。
5. 編輯“90°C 6分鐘偶聯(lián)”微波方法以使用以下參數(shù)值：
6. 輸入所有參數(shù)值后，選擇“保存”。
步驟2：使用編程的微波方法
創(chuàng)建循環(huán)創(chuàng)建“0.10-雙90°C 6分鐘偶聯(lián)（高膨脹）”循環(huán)編輯器
1. 從“編輯”選項卡中，選擇“循環(huán)”。
2. 選擇以下篩選條件：“0.10”合成規(guī)模、“氨基酸”和“高膨脹”。
3. 通過選中并點擊復(fù)制按鈕，創(chuàng)建“0.10-單偶聯(lián)（高膨脹）”的副本。重命名為“0.10-雙90°C 6分鐘偶聯(lián)（高膨脹）”。
4. 編輯“0.10-雙90°C 6分鐘偶聯(lián)（高膨脹）”循環(huán)，以使用以下循環(huán)步驟和參數(shù)值：
5.輸入所有循環(huán)步驟和參數(shù)后，選擇“保存”。
步驟3：將循環(huán)應(yīng)用于Liberty方法
1. 從“編輯”選項卡中，選擇“Liberty方法”以創(chuàng)建新的Liberty方法。
2. 在包含棕櫚酸溶液的位置的N端添加一個值（一個字母代碼）。
3. 編輯Liberty方法，使用以下方法選項：
• C端：根據(jù)樹脂連接子的指示
• 樹脂類型：根據(jù)需要選擇
• 樹脂循環(huán)：根據(jù)需要選擇
• 最終脫保護循環(huán)：0.10-無最終脫保護
4. 在氨基酸循環(huán)網(wǎng)格中，雙擊棕櫚酸偶聯(lián)的位置，并從下拉菜單中選擇“0.10-90°C 6分鐘雙偶聯(lián)”循環(huán)。
5. 選擇“保存”并關(guān)閉循環(huán)編輯器。
6. 將Liberty方法加載到樹脂指示器位置。
7. 為確保準備足夠的試劑溶液，選擇“計算器”選項卡，然后選擇“用量計算器”。請參閱“步驟4：準備試劑”以了解重要的試劑制備。
步驟4：準備試劑
1. 在DMF中制備0.2 M的棕櫚酸溶液，并將其轉(zhuǎn)移到干凈的干燥離心管中。根據(jù)方法指示將其加載到所需位置。
注意：
如果棕櫚酸溶液不易溶解，請進行10分鐘的超聲波處理。
2. 稱量所需的樹脂并轉(zhuǎn)移到干凈的反應(yīng)容器中。將反應(yīng)容器固定在衰減器上，然后放入微波腔中。
3. 準備任何其他必要的試劑，將其加載到儀器上，并開始Liberty方法。
二、案例研究：α-黑色素細胞刺激激素（CH3(CH2)14CONH-SYSMEHFRWGKPV-NH2）的自動化棕櫚酰化
肽合成
使用CEM Liberty Blue自動化微波肽合成儀在0.50克Rink酰胺ProTide LL樹脂（0.20毫當(dāng)量/克替代度）上以0.1毫摩爾規(guī)模制備了棕櫚酰化的α-黑色素細胞刺激激素CH3(CH2)14CONH-SYSMEHFRWGKPV-NH2（圖3）。脫保護步驟采用20%哌啶的DMF溶液。偶聯(lián)反應(yīng)使用5倍過量的Fmoc-AA-OH和棕櫚酸，以及1.0 M DIC的DMF溶液和1.0 M Oxyma Pure的DMF溶液進行。切割使用CEM Razor高通量肽切割系統(tǒng)進行，切割溶液為92.5:2.5:2.5:2.5 TFA/H2O/TIS/DODT。切割后，將肽在Et2O中沉淀并冷凍干燥過夜。
圖3. 棕櫚酰化的α-黑色素細胞刺激激素
分析
該肽在配備了Acquity UPLC BEH C8柱（1.7 μm，2.1 x 100 mm）的Thermo Scientific Vanquish UPLC系統(tǒng)上進行分析，并使用PDA檢測器。UPLC系統(tǒng)連接至Thermo Exactive Plus Orbitrap，用于結(jié)構(gòu)測定。峰分析通過Thermo Chromeleon軟件完成。分離采用梯度洗脫方法，使用0.1% TFA在（i）水中和（ii）乙腈中進行。
結(jié)果與結(jié)論
使用Liberty Blue自動化微波肽合成儀進行CH3(CH2)14CONH-SYSMEHFRWGKPV-NH2（分子量 = 1861）的微波增強固相肽合成（SPPS），目標肽的純度為75%（見圖4和圖5）。總合成時間為1小時41分鐘，共產(chǎn)生300毫升廢物。
圖4. CH3(CH2)14CONH-SYSMEHFRWGKPV-NH2的UPLC色譜圖
圖5. CH3(CH2)14CONH-SYSMEHFRWGKPV-NH2在保留時間5.13分鐘時的質(zhì)譜圖
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