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概述:N端和C端檢測技術服務詳情介紹
dànbáizhì功能依賴于特定的三維結構,而結構的形成則始于氨基酸鏈的線性排列。在這條鏈狀分子中,兩個末端——氨基末端(N端)和羧基末端(C端)——不僅是dànbáizhì合成的起點與終點,更是調控dànbáizhì命運的關鍵功能位點。理解N端和C端的特性,對揭示dànbáizhì工作機制及疾病機制具有重要意義。
一、N端和C端的化學本質
dànbáizhì由氨基酸通過肽鍵線性連接而成。每個氨基酸含有一個氨基(-NH?)和一個羧基(-COOH)。在肽鏈合成過程中,氨基作為起點參與縮合反應,形成肽鍵后保留游離氨基的一端稱為N端;羧基作為終點保留游離羧基的一端則為C端。這種方向性(N→C)由核糖體翻譯過程嚴格決定,并貫穿于dànbáizhì的整個生命周期:
N端(氨基端):鏈的起始端,含有一個游離的氨基基團;
C端(羧基端):鏈的終止端,含有一個游離的羧酸基團。
這種方向性不僅是dànbáizhì一級結構的標志,還直接影響其gāojí結構的形成。例如,α螺旋和β折疊的走向、結構域的組裝均與N端和C端的空間排布密切相關。
二、生物學功能的分工與協同
1、N端的核心角色
(1)dànbáizhì合成的起點
N端是翻譯起始的錨定點,其序列特征(如起始密碼子)直接影響翻譯效率與準確性。
(2)定位信號的核心載體
許多dànbáizhì的N端攜帶信號肽序列,指導其靶向至內質網、線粒體等特定細胞器。例如,分泌蛋白通過N端信號肽進入分泌途徑。
(3)翻譯后修飾的調控位點
N端乙酰化是zuì常見的共價修飾之一,可影響dànbáizhì穩定性、亞細胞定位及相互作用網絡。
2、C端的功能多樣性
(1)結構穩定性的貢獻者
C端常參與疏水核心的形成或與相鄰結構域相互作用,維持dànbáizhì整體構象。
(2)功能模塊的集成平臺
部分dànbáizhì的C端攜帶酶活性中心、結合位點或調控結構域,例如G蛋白偶聯受體(GPCR)的C端參與信號轉導。
(3)降解信號的儲存庫
某些C端序列(如降解標簽)可被泛素-蛋白酶體系統識別,調控dànbáizhì的周轉速率。
3、N端和C端的測序方法
(1)Nduāncèxù
Nduāncèxù的經典方法是Edman降解,它利用異硫氰酸苯酯(PITC)與N-端氨基酸反應,形成PTH-氨基酸衍生物,然后逐步去除N端殘基并檢測其種類。這種方法具有較高的jīngquè度,能夠提供單氨基酸分辨率的序列信息。然而,Edman降解受限于N端修飾,如乙酰化或甲酰化的蛋白無法直接測定。此外,該方法適用于短肽和高純度蛋白,但在復雜dànbáizhì組學研究中應用受限。因此,現代N-duāncèxù主要依賴質譜分析,尤其是LC-MS/MS(液相色譜-串聯質譜)技術。通過使用特定的蛋白酶(如Lys-N)定向裂解N-端附近的肽鍵,結合高分辨率質譜,可以同時解析N端序列及其翻譯后修飾。Top-down MS(全dànbáizhì譜)方法也用于Nduāncèxù,它無需酶解蛋白,可直接檢測完整蛋白,并通過碎裂模式解析N-端結構。這些方法克服了Edman降解的局限性,提高了N-duāncèxù的通量和靈敏度。
(2)Cduāncèxù
相較于N端,Cduāncèxù更加具有挑戰性。由于缺乏像Edman降解這樣的高效化學降解策略,Cduāncèxù主要依賴羧肽酶降解法和質譜技術。羧肽酶降解法利用特定羧肽酶(如Carboxypeptidase A/B/Y)從C端逐步水解氨基酸,并通過色譜或質譜分析釋放的氨基酸殘基,從而推測C端序列。然而,該方法受限于羧肽酶的特異性,并且無法處理C端修飾(如酰胺化、糖基化)蛋白。此外,逐步降解的過程較慢,測序效率低,因此其在高通量dànbáizhì組學研究中的應用較少。現代Cduāncèxù更傾向于利用LC-MS/MS,通過特定C端蛋白酶(如Asp-N、Glu-C)消化蛋白,并結合質譜檢測C-端肽段。Top-down MS在Cduāncèxù中的應用也日益增多,它能夠直接檢測完整蛋白的C端序列,并解析C端修飾信息。此外,Middle-down MS策略通過部分酶解保留較長的C端片段,從而提高C端序列的覆蓋率,克服了Bottom-up MS策略中C端片段可能丟失的問題。
N端和C端作為dànbáizhì的“分子shēnfènzhèng”,不僅定義了其化學本質,更通過動態修飾與相互作用參與生命活動的精密調控。隨著dànbáizhì組學技術的進步,對末端功能的研究將持續推動疾病診斷、藥物開發及合成生物學等領域的突破。憑借zhuānyè的技術團隊和7大質量控制檢測平臺,百泰派克生物科技為從事dànbáizhì組學研究的科研人員提供高質量的dànbáizhìN/Cduāncèxù服務,獲得廣泛認可。
百泰派克生物科技特色項目
一、蛋白測序
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上先進的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
二、dànbáizhì組學
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
三、單細胞質譜流式技術分析
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術先進,填補技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
五、生物藥物表征
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
百泰派克生物科技七大檢測平臺
百泰派克生物科技-生物制品表征,生物質譜多組學優質服務商
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務;
3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
5.服務3000+企業,10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!