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2. 色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔(dān)負(fù)分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。對色譜柱的要求是柱效高、選擇性好，分析速度快等。關(guān)于色譜柱的安裝、維護(hù)、保存以及由色譜柱導(dǎo)致的這樣那樣的色譜故障也是一門學(xué)問。
   

3. 加裝保護(hù)柱——保護(hù)柱的作用是過濾掉來自流動(dòng)相和樣品的化學(xué)“拉圾”同時(shí)也可以有效除去流動(dòng)相和樣品中的不溶物。盡管現(xiàn)在的色譜儀在流動(dòng)相吸入口、進(jìn)樣閥后部以及在色譜柱的兩端都裝有1、2μm等不同孔徑的濾器,但濾器只能除去不溶性顆粒而不能除去化學(xué)污染,因此,加裝保護(hù)柱是必要的,特別是在分析中藥、中成藥等復(fù)雜混合物和生物樣品時(shí)更是保護(hù)分析柱的措施。保護(hù)柱填料應(yīng)與分析柱一致,粒徑可較分析柱大。保護(hù)柱屬消耗品,經(jīng)過一定次數(shù)的樣品分析(50～100次)后,出現(xiàn)柱壓顯著升高或峰形變壞或基線漂移時(shí),應(yīng)考慮更換保護(hù)柱。

4. 過濾流動(dòng)相和樣品——流動(dòng)相通常由水或緩沖溶液與有機(jī)溶劑混合而成,原則上,所有經(jīng)過色譜柱的流動(dòng)相均應(yīng)過濾,但在實(shí)際操作上應(yīng)視具體情況而有所區(qū)別:當(dāng)有機(jī)溶劑用色譜純級,水用石英亞沸水或其它超純水時(shí),在能確保水和有機(jī)溶劑的質(zhì)量且沒有受到污染時(shí),過濾并無更多實(shí)際意義。當(dāng)流動(dòng)相中含有緩沖鹽時(shí),則過濾是必要的,如前所述,當(dāng)緩沖溶液放置一段時(shí)間(視環(huán)境溫度不同而異,夏季一般不超過48 h,冬季一般不超過一周)后,在使用前還應(yīng)重新過濾。所配制的樣品試液在注入流路系統(tǒng)前均要經(jīng)0. 45μm ( 0. 22μm則更好)孔徑濾膜過濾。要注意區(qū)分水系和油系,二者不可混用,以防止濾膜溶解而造成污染。裝流動(dòng)相的容器和色譜系統(tǒng)中的在線濾器要定期清洗和更換,以避免濾器因過載而起不到過濾作用。

5. 凈化樣品——當(dāng)樣品中含有對色譜柱有損害的化學(xué)成分,如產(chǎn)生性吸附的蛋白質(zhì)、糖等有機(jī)分子和強(qiáng)吸附性物質(zhì),以及可能對柱填料產(chǎn)生破壞作用的基團(tuán)離子。在進(jìn)樣前應(yīng)盡可能對樣品進(jìn)行分離提純以除去多余雜質(zhì)組分。

6. 避免高柱壓——雖然高效液相色譜柱能耐受的壓力可達(dá)6000 p si (磅/平方英寸) ,但過高及過大的壓力變化均會縮短色譜柱的壽命,避免的方法是：

   （1）柱壓過高時(shí),盡可能采用較小的流速,以不超過柱最大允許壓力的一半為宜。

   （2）當(dāng)流速較大時(shí),應(yīng)采取流速梯度的辦法使流速分步到位。

   （3）使用手動(dòng)進(jìn)樣閥時(shí),進(jìn)樣閥的切換要盡可能的快。否則超過20%的壓力沖擊會很快使柱報(bào)廢。當(dāng)使用多柱聯(lián)用時(shí),柱切換要避免在高壓下進(jìn)行。

7. 注意溫度和酸堿度——一般以硅膠為基質(zhì)的色譜柱最高使用溫度不超過60℃,以低于40℃為宜,特別是在流動(dòng)相pH接近使用限度時(shí),更應(yīng)降低使用溫度。

   溫度過高會加快鍵合相的水解和硅膠的溶解,從而使填料性質(zhì)改變,柱床塌陷,降低柱效,改變峰形。

   目前的鍵合硅膠色譜柱標(biāo)示的pH適用范圍可達(dá)2～10,但在實(shí)際使用時(shí)應(yīng)避的pH條件,特別是在偏堿性的條件(pH≥8)下使用 ,如必須要在的pH條件下使用時(shí),可通過以下方法避免柱損害:

   （1）在泵和進(jìn)樣閥之間加裝預(yù)柱(飽和柱)來飽和流動(dòng)相

   （2）降低使用溫度

   （3）檢驗(yàn)完畢后立即用與所使用的流動(dòng)相互相混溶的“溫和溶劑”*清洗

8. 正確及時(shí)的沖洗——開始試驗(yàn)前,應(yīng)了解柱中當(dāng)前是何種溶劑。對于新色譜柱,如無特殊說明均為評價(jià)報(bào)告中所用流動(dòng)相。柱中當(dāng)前溶劑一定要與分析樣品所用流動(dòng)相互溶,如不能混溶,要用與二者均能相互混溶的第三種溶劑過渡。

9. 液相色譜儀使用操作規(guī)程總流程：

10. 　　超純水沖洗柱――流動(dòng)相分離樣品――超純水沖洗柱――純乙睛保存柱

11. 　　1．電源準(zhǔn)備

12. 　　打開穩(wěn)壓器電源開關(guān)，須待電壓指示至220V后，才能開啟其他有關(guān)設(shè)備。

13. 　　2．LC-600高效液相色譜儀的準(zhǔn)備

14. 
    

15. 　　乙腈(Fisher公司產(chǎn)品色譜純)

16. 　　超純水(Millipore超純水)

17. 　　冰乙酸

18. 　　溶液配置：貯液瓶與流動(dòng)相的準(zhǔn)備

19. 　　A液0.1%1ml，超純水999ml）室溫保存

20. 　　B液60%乙腈（乙腈600ml，超純水400ml）室溫保存

21. 　　樣品液0.01%乙酸（冰乙酸10l超純水100ml）室溫保存

22. 　　泵頭沖洗液：精濾后超純水或者是1%色譜純甲醇室溫保存

23. 　　注：貯液瓶應(yīng)用超純水淌洗干凈，備用。

24. 　　流動(dòng)相溶劑用潔凈G4玻沙漏斗精濾除去微小顆粒（目前未濾過溶液）。

25. 　　操作者必須清楚并注明A、B貯液瓶盛裝為何種溶劑。

26. 　　沖洗泵頭：用注射管于軟塑料管末端抽吸至有水流出，調(diào)節(jié)流速開關(guān)控制流速為20-30drop/min.（目前我們很少沖泵頭。）

27. 　　①流動(dòng)相管道排氣

28. 　　如果，管道中氣泡較多，可通過彈擊管道，排除氣泡，并逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)脫氣泵活塞使其松動(dòng)，用注射管于流動(dòng)相出口的塑料管末端抽吸至管道內(nèi)氣泡排除*。操作時(shí)，我們通常已經(jīng)打開了脫氣機(jī)（氣泡嚴(yán)重影響分離效果，所以觀察管道中液體是否有氣泡非常重要。）

29. 　　②開機(jī)

30. 　　③進(jìn)入LC-600高效液相色譜儀操作系統(tǒng)

31. 　　④數(shù)據(jù)記錄的終止與保存

32. 　　3．關(guān)機(jī)

33. 　　1）N2000色譜工作站的關(guān)閉

34. 　　在N2000的主操作界面上分別單擊關(guān)閉泵、檢測器圖標(biāo)，或通過菜單關(guān)閉。關(guān)閉電腦主機(jī)及顯示器。將所有使用儀器用布蓋好。關(guān)閉排氣扇、空調(diào)與穩(wěn)壓器開關(guān)。

35. 　　2）清潔衛(wèi)生

36. 　　實(shí)驗(yàn)完畢后，打掃儀器室桌面與地面清潔，保持桌面整潔。

37. 　　3）儀器使用記錄

38. 　　記錄當(dāng)天的儀器使用情況于記錄本上，包括儀器使用起止時(shí)間與出現(xiàn)問題的解決方案，并簽上操作者的名字.

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