為了保證取樣的準確性，移液器應定期校準，一般來說，一年需校準兩次，兩次間隔不超過半年，如果是量程小于10μL的移液器可送有資質的單位校準。
1、校準條件：1）校準環境：移液器應在室溫為（20±5）℃之間，且室溫變化不得大于1℃/h的條件下進行；
2）校準介質：使用超純水，提前24h放入實驗室內，使其溫度與室溫溫差不得大于2℃；
3）校準設備：主要設備必須經法定技術機構鑒定合格且在鑒定周期內。電子天平（測量范圍200g；分度值0.1mg）；溫濕度表；溫度計（測量范圍（0~50）℃；分度值0.1℃）；燒杯（50ml）1個；燒杯（100ml）1個；定性濾紙若干小塊（經恒溫處理）。
2、校準方法：1）打開電子天平，空載調零，將溫度計放置在盛放超純水的器皿內；
2）放入燒杯待天平顯示穩定后，按下歸零鍵歸零，給移液器上安裝吸液嘴，對移液器的槍頭進行預洗，在移液器校準記錄表上記錄當前的環境溫濕度；
3）將移液器的容量調至被檢點；
4）垂直的握住移液器，將按鈕旋轉至檢定位置，此時將吸液嘴侵入裝有超純水的容器內，并保持在液面下1~3mm處，緩慢放松按鈕，等待1s~2s后離開液面，如吸液嘴占有多余液體，則使用定性濾紙吸干（小心勿觸及吸液嘴口）；
5）將吸液嘴流液口靠在天平秤盤上的燒杯內壁，并與其成大約45°角，緩慢地把按鈕按至第一停止點，等待1s~2s后再將按鈕快速*按下，然后將吸液嘴沿著稱量杯的內壁向上移開。
6）待天平顯示穩定后，馬上讀取并在移液器校準記錄表上記錄此時電子天平顯示出的數值。記錄完畢將電子天平復零；
7）重復5次執行（4）~（6）條。記錄完畢，將移液器的容量調至下一被檢點繼續。被檢點遵循從小到大的原則進行調整。
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